惡性瘧原蟲對(duì)蒿甲醚等抗瘧藥敏感性體外測(cè)定
作者:楊品芳 楊恒林 楊滄江
單位:云南省瘧疾防治研究所 思茅 665000
關(guān)鍵詞:惡性瘧原蟲;蒿甲醚;咯萘啶;氯喹;體外敏感性測(cè)定
實(shí)用寄生蟲病雜志990105 提要 作者等1997年8-10月,參照Rieckmann體外微量測(cè)定法原理,制作了蒿甲醚測(cè)定板,并在云南南部測(cè)定了惡性瘧原蟲對(duì)該藥及咯萘啶、氯喹的敏感性。測(cè)定成功率分別為76.19%(32/42)、72.50%(29/40)和73.81%(31/42);ID50依次為180、72及128nmol/L;ID95為1600、416及640nmol/L。蒿甲醚板與氯喹板相比,測(cè)定成功率相同,瘧原蟲在各濃度藥井中的抑制率亦同氯喹板一樣,隨藥物濃度的增高而依次上升,而裂殖體形成例數(shù)依次減少。提示本文制作的蒿甲醚測(cè)定板藥性穩(wěn)定,測(cè)定結(jié)果可靠,可用于現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)。咯萘啶與以往測(cè)定結(jié)果相比,敏感性又有所下降。
, 百拇醫(yī)藥
IN VITRO SENSITIVITY OF PLASMODIUM FALCIPARUM TO ARTEMETHER
Yang Pinfang,Yang Henglin,Yang Cangjiang
Yunnan Institute of Malaria Control, Simao 665000
ABSTRACT
In 1997, Rieckmann's microtechnic method has been applied to explore the sensitivity of P.falciparum to artemether, pyronaridine and chloroquine in vitro. The successful rates were 76.19%(32/42), 72.50%(29/40), and 73.81%(31/41); ID50 were 180, 72, and 128 nmol/L; and ID95 were 1600, 416 and 640 nmol/L respectively. In comparison of chloroquine-tested plate with artemether one,similar results i.e. the more drug concentration the more schizont inhibited rate and the less number of schizont formed were obtained. The results showed that the function of the artemether-tested plate was stable, reliable and it could be used for the in vitro susceptibility test in the field. Besides, to compare the results in the past, the sensitivity of P.falciparum was decreased in 1997 to pyronaridine.
, 百拇醫(yī)藥
Key words: Plasmodium falciparum,in vitro,artemether, chloroquine, pyronaridine
為提供簡(jiǎn)便易行的制板方法和現(xiàn)場(chǎng)體外監(jiān)測(cè)方法,提供敏感性數(shù)據(jù),指導(dǎo)藥物敏感性監(jiān)測(cè)及合理使用抗瘧藥,作者等進(jìn)行了本項(xiàng)研究。
1 材料與方法
1.1 測(cè)定板及培養(yǎng)基的制備 蒿甲醚粉劑由中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院寄生蟲病研究所提供,含量為100%,分子量為298.388。取蒿甲醚4.8mg,溶于1ml氯仿中,用無水乙醇稀釋至所需濃度(最高濃度為160pmol/井,其氯仿與乙醇比例為1∶4000。載藥板采用上海第三塑料廠生產(chǎn)的細(xì)胞毒反應(yīng)板,每板4行,每行10井。1及10井為無藥對(duì)照井,僅加20μl 1∶4000氯仿乙醇溶液。2-9井依次加入20μl分別含有1.25、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0及160.0pmol蒿甲醚溶液。38℃恒溫干燥2h,透明膠帶密封井口,紫外線(照距50cm)照射消毒1h。4℃冰箱保存?zhèn)溆,部分測(cè)定板室溫保存,以比較室溫條件下存放的有效期。氯喹測(cè)定板及咯萘啶測(cè)定板按以往介紹方法[1,2]制備。1及10號(hào)井為無藥對(duì)照,2-8號(hào)井氯喹含量分別為1、2、4、8、16、32及64pmol?┹拎ず恳来螢0.25、0.5、1、2、4、8、16及32pmol。培養(yǎng)基按劉德全等介紹方法[3]制備,每支2ml無菌安瓿中含RPMI 1640完全培養(yǎng)基1.8ml,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br/>, 百拇醫(yī)藥
1.2 血樣采集 選擇單一感染惡性瘧患者,肝素抗凝采靜脈血1-2ml待測(cè),取血后病人給予青蒿素類藥正規(guī)治療。
1.3 測(cè)定方法與結(jié)果判斷 在每支培養(yǎng)基中加入0.2ml含蟲血,混勻后用定量吸管每井依次加入50μl含蟲血培養(yǎng)基。參照Rieckmann體外微量法[4]在37℃±1℃恒溫箱中孵育24-36h。對(duì)照井裂殖體率在20%以上為測(cè)定成功,反之為測(cè)定失敗。測(cè)定成功病例計(jì)數(shù)200個(gè)無性體中的裂殖體數(shù),以對(duì)照井裂殖體為基數(shù)計(jì)算出各井裂殖體抑制率,在半對(duì)數(shù)表格中查算出半數(shù)抑制量(ID50)及完全抑制量(ID95)。用幾何均數(shù)計(jì)算平均完全抑制裂殖體形成的平均濃度(CIMC)。
2 結(jié)果 在蒿甲醚測(cè)定板中共測(cè)定成功32例,成功率為76.19%(32/42),咯萘啶、氯喹板測(cè)定成功率分別為72.50%(29/40)及73.81%(31/42)。完全抑制裂殖體形成的最低濃度,蒿甲醚為5pmol井,咯萘啶及氯喹分別為1及16pmol井,分別有1、5及19例瘧原蟲在最高濃度的蒿甲醚、咯萘啶及氯喹板中發(fā)育至裂殖體。在各藥濃度井中發(fā)育至裂殖體的例數(shù)見表1。在各藥井中的平均抑制率見表2,在最低濃度井的平均抑制率蒿甲醚為11.45%,咯萘啶、氯喹分別為0.68%及3.02%,最高濃度井抑制率依次為98.94%、98.70%及91.14%。ID50及ID95見表2。除1例瘧原蟲能在160pmol的蒿甲醚藥中發(fā)育至裂殖體外,其他各例均受到抑制,CIMI為560.1 nmol/L。瘧原蟲在蒿甲醚、咯萘啶、氯喹測(cè)定板對(duì)照井中發(fā)育至裂殖體的平均數(shù)分別為118、104及108個(gè)。
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表1.惡性瘧原蟲在各藥井中發(fā)育到裂殖體的例數(shù)
Table 1.Number of cases with falciparum schizont formation in each well 藥物
Drug
各井發(fā)育至裂殖體例數(shù)
No.case with schizont in different well
1
2
3
4
5
, 百拇醫(yī)藥
6
7
8
9
蒿甲醚
Artemether
32
32
32
30
27
21
11
5
, http://www.www.srpcoatings.com
1
咯萘啶
Pyronaridine
29
29
28
27
21
13
10
5
5
氯 喹
, http://www.www.srpcoatings.com Chloroquine
31
31
31
31
31
30
29
19
-
*:1號(hào)為對(duì)照井,2號(hào)井中蒿甲醚、咯萘啶、氯喹含量分別為1.25、0.25和1 pmol,3-9號(hào)井依次倍增。
Well No.1 was control.Well No.2 contained artemether,pyronaridine and chloroquine concentration of 1.25,0.25 and 1 pmol,respectively.The concentration in well No.3-9 was doubled in order.
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表2.云南南部惡性瘧原蟲對(duì)蒿甲醚、咯萘啶、氯喹體外測(cè)定結(jié)果
Table 2.In vitro sensitivity of P.falciparum from south Yunnan to artemether,pyronaridine and chloroquine. 藥物
Drug
例數(shù)
No.
case
惡性瘧原蟲在各藥井的抑制率(%)
Inhibition rate in different well
ID50
, 百拇醫(yī)藥
(nmol/L)
ID95
(nmol/L)
2
3
4
5
6
7
8
9
蒿甲醚
Artemether
, http://www.www.srpcoatings.com
32
11.5
18.4
30.8
51.7
71.7
80.1
91.9
98.9
180
1600
咯萘啶
Pyronaridine
, http://www.www.srpcoatings.com
29
0.7
5.3
24.2
41.6
70.0
84.0
90.9
98.8
72
416
氯 喹
Chloroquine
, 百拇醫(yī)藥
31
3.0
9.4
12.9
19.0
24.1
46.5
91.1
-
128
640
3 討論 為了解惡性瘧原蟲對(duì)抗瘧藥的敏感性,指導(dǎo)合理使用抗瘧藥,楊恒林等[5,6]曾在云南邊境地區(qū)測(cè)定了惡性瘧原蟲對(duì)氯喹、阿莫地喹、甲氟喹、奎寧、磺胺多辛/乙胺嘧啶、青蒿琥酯、還原青蒿素、蒿乙醚、咯萘啶等藥的敏感性,而對(duì)蒿甲醚由于制板困難,僅做過一些有限的試驗(yàn)性測(cè)定。為摸索制板方法,進(jìn)行了反復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究。曾用苯乙醇作溶劑制作的測(cè)定板測(cè)得的CIMC、ID50、ID95明顯低于同類藥中的蒿乙醚[6],估計(jì)與藥物溶解不充分有關(guān)。用氯仿溶藥制作的測(cè)定板測(cè)得的結(jié)果與蒿乙醚相似,在4℃恒溫中保存有效期達(dá)8個(gè)月以上。本研究現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定成功率與氯喹、咯萘啶相同,瘧原蟲抑制率亦同氯喹板一樣隨藥物濃度的增加而依次上升,而裂殖體形成數(shù)則依次減少,提示本方法制作的測(cè)定板藥性穩(wěn)定,測(cè)定成功率高,結(jié)果可靠,簡(jiǎn)便易行,可推廣應(yīng)用。
, 百拇醫(yī)藥
蒿甲醚測(cè)定板對(duì)照井平均裂殖體數(shù)與其他兩種測(cè)定板相同,測(cè)定成功率亦然,提示本文所采用的氯仿乙醇溶劑對(duì)瘧原蟲生長(zhǎng)無影響。惡性瘧原蟲在最低蒿甲醚井中的抑制率為11.5%,最高藥物濃度井為98.9%,提示本文設(shè)置的劑量組是恰當(dāng)?shù)摹盒辕懺x氯喹敏感性體內(nèi)觀察法與體外微量測(cè)定法對(duì)比研究結(jié)果[8]顯示在抗性程度較高地區(qū)兩種方法測(cè)定結(jié)果相一致,而抗性較低地區(qū)則體外法較體內(nèi)法靈敏,更能反映敏感性的客觀情況,且較簡(jiǎn)便易行,省時(shí)省力。本文提供的制板方法及數(shù)據(jù)為該藥的敏感性縱向監(jiān)測(cè)奠定了基礎(chǔ)。
咯萘啶在云南僅做過一些藥物臨床研究和敏感性體外測(cè)定[6,7],本文所測(cè)結(jié)果與1988年[2]及1995[6]年相比,ID50、ID95依次上升,比1988年分別上升4.5倍(72/13)和7.6倍(416/48),比1995年上升1.3倍(72/32)和2.9倍(416/108)。本研究29例中有10例原蟲顯示抗性,其5例在最高藥物濃度井中仍能形成裂殖體,提示當(dāng)?shù)貝盒辕懺x對(duì)該藥敏感性繼續(xù)下降,該藥目前似不宜單獨(dú)用于治療當(dāng)?shù)貝盒辕憽?br/>, http://www.www.srpcoatings.com
基金項(xiàng)目:聯(lián)合國(guó)計(jì)劃開發(fā)署/世界銀行/世界衛(wèi)生組織熱帶病研究培訓(xùn)特別規(guī)劃處資助項(xiàng)目(900098).
The project received the financial support from UNDP/World Bank/WHO/TDR(900098).
4 參考文獻(xiàn)
1 劉德全,等.抗氯喹惡性瘧原蟲體外測(cè)定用冰凍培養(yǎng)基的制備及涂氯喹板的改進(jìn).寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志 1983;1∶44.
2 楊恒林,等.惡性瘧原蟲對(duì)咯萘啶、青蒿琥酯敏感性現(xiàn)場(chǎng)體外測(cè)定.中國(guó)寄生蟲病防治雜志 1988;2∶169.
3 劉德全,等.一種便于現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定惡性瘧原蟲抗藥性的培養(yǎng)基.中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志 1989;7∶112.
, http://www.www.srpcoatings.com
4 Rieckmann KH,et al.Drug sensitivity of Plasmodium falciparum.An in vitro microtechnique.Lancet 1978;1∶22.
5 Yang HL,et al.In vitro response of Plasmodium falciparum on the China-Vietnam border to nine antimalarials.Southeast Asian J Trop Med Pub Hlth 1995;26∶397.
6 楊恒林,等.云南省惡性瘧原蟲對(duì)青蒿素類藥物及咯萘啶與氯喹敏感性的體外測(cè)定.中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志 1997;15∶292.
7 楊恒林,等.惡性瘧原蟲對(duì)咯萘啶敏感性監(jiān)測(cè)及臨床研究現(xiàn)狀.實(shí)用寄生蟲病雜志 1997;5∶34.
8 車立剛,等.云南惡性瘧抗氯喹株的地理分布調(diào)查.中華流行病學(xué)雜志 1986;7∶88., 百拇醫(yī)藥
單位:云南省瘧疾防治研究所 思茅 665000
關(guān)鍵詞:惡性瘧原蟲;蒿甲醚;咯萘啶;氯喹;體外敏感性測(cè)定
實(shí)用寄生蟲病雜志990105 提要 作者等1997年8-10月,參照Rieckmann體外微量測(cè)定法原理,制作了蒿甲醚測(cè)定板,并在云南南部測(cè)定了惡性瘧原蟲對(duì)該藥及咯萘啶、氯喹的敏感性。測(cè)定成功率分別為76.19%(32/42)、72.50%(29/40)和73.81%(31/42);ID50依次為180、72及128nmol/L;ID95為1600、416及640nmol/L。蒿甲醚板與氯喹板相比,測(cè)定成功率相同,瘧原蟲在各濃度藥井中的抑制率亦同氯喹板一樣,隨藥物濃度的增高而依次上升,而裂殖體形成例數(shù)依次減少。提示本文制作的蒿甲醚測(cè)定板藥性穩(wěn)定,測(cè)定結(jié)果可靠,可用于現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)。咯萘啶與以往測(cè)定結(jié)果相比,敏感性又有所下降。
, 百拇醫(yī)藥
IN VITRO SENSITIVITY OF PLASMODIUM FALCIPARUM TO ARTEMETHER
Yang Pinfang,Yang Henglin,Yang Cangjiang
Yunnan Institute of Malaria Control, Simao 665000
ABSTRACT
In 1997, Rieckmann's microtechnic method has been applied to explore the sensitivity of P.falciparum to artemether, pyronaridine and chloroquine in vitro. The successful rates were 76.19%(32/42), 72.50%(29/40), and 73.81%(31/41); ID50 were 180, 72, and 128 nmol/L; and ID95 were 1600, 416 and 640 nmol/L respectively. In comparison of chloroquine-tested plate with artemether one,similar results i.e. the more drug concentration the more schizont inhibited rate and the less number of schizont formed were obtained. The results showed that the function of the artemether-tested plate was stable, reliable and it could be used for the in vitro susceptibility test in the field. Besides, to compare the results in the past, the sensitivity of P.falciparum was decreased in 1997 to pyronaridine.
, 百拇醫(yī)藥
Key words: Plasmodium falciparum,in vitro,artemether, chloroquine, pyronaridine
為提供簡(jiǎn)便易行的制板方法和現(xiàn)場(chǎng)體外監(jiān)測(cè)方法,提供敏感性數(shù)據(jù),指導(dǎo)藥物敏感性監(jiān)測(cè)及合理使用抗瘧藥,作者等進(jìn)行了本項(xiàng)研究。
1 材料與方法
1.1 測(cè)定板及培養(yǎng)基的制備 蒿甲醚粉劑由中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院寄生蟲病研究所提供,含量為100%,分子量為298.388。取蒿甲醚4.8mg,溶于1ml氯仿中,用無水乙醇稀釋至所需濃度(最高濃度為160pmol/井,其氯仿與乙醇比例為1∶4000。載藥板采用上海第三塑料廠生產(chǎn)的細(xì)胞毒反應(yīng)板,每板4行,每行10井。1及10井為無藥對(duì)照井,僅加20μl 1∶4000氯仿乙醇溶液。2-9井依次加入20μl分別含有1.25、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0及160.0pmol蒿甲醚溶液。38℃恒溫干燥2h,透明膠帶密封井口,紫外線(照距50cm)照射消毒1h。4℃冰箱保存?zhèn)溆,部分測(cè)定板室溫保存,以比較室溫條件下存放的有效期。氯喹測(cè)定板及咯萘啶測(cè)定板按以往介紹方法[1,2]制備。1及10號(hào)井為無藥對(duì)照,2-8號(hào)井氯喹含量分別為1、2、4、8、16、32及64pmol?┹拎ず恳来螢0.25、0.5、1、2、4、8、16及32pmol。培養(yǎng)基按劉德全等介紹方法[3]制備,每支2ml無菌安瓿中含RPMI 1640完全培養(yǎng)基1.8ml,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br/>, 百拇醫(yī)藥
1.2 血樣采集 選擇單一感染惡性瘧患者,肝素抗凝采靜脈血1-2ml待測(cè),取血后病人給予青蒿素類藥正規(guī)治療。
1.3 測(cè)定方法與結(jié)果判斷 在每支培養(yǎng)基中加入0.2ml含蟲血,混勻后用定量吸管每井依次加入50μl含蟲血培養(yǎng)基。參照Rieckmann體外微量法[4]在37℃±1℃恒溫箱中孵育24-36h。對(duì)照井裂殖體率在20%以上為測(cè)定成功,反之為測(cè)定失敗。測(cè)定成功病例計(jì)數(shù)200個(gè)無性體中的裂殖體數(shù),以對(duì)照井裂殖體為基數(shù)計(jì)算出各井裂殖體抑制率,在半對(duì)數(shù)表格中查算出半數(shù)抑制量(ID50)及完全抑制量(ID95)。用幾何均數(shù)計(jì)算平均完全抑制裂殖體形成的平均濃度(CIMC)。
2 結(jié)果 在蒿甲醚測(cè)定板中共測(cè)定成功32例,成功率為76.19%(32/42),咯萘啶、氯喹板測(cè)定成功率分別為72.50%(29/40)及73.81%(31/42)。完全抑制裂殖體形成的最低濃度,蒿甲醚為5pmol井,咯萘啶及氯喹分別為1及16pmol井,分別有1、5及19例瘧原蟲在最高濃度的蒿甲醚、咯萘啶及氯喹板中發(fā)育至裂殖體。在各藥濃度井中發(fā)育至裂殖體的例數(shù)見表1。在各藥井中的平均抑制率見表2,在最低濃度井的平均抑制率蒿甲醚為11.45%,咯萘啶、氯喹分別為0.68%及3.02%,最高濃度井抑制率依次為98.94%、98.70%及91.14%。ID50及ID95見表2。除1例瘧原蟲能在160pmol的蒿甲醚藥中發(fā)育至裂殖體外,其他各例均受到抑制,CIMI為560.1 nmol/L。瘧原蟲在蒿甲醚、咯萘啶、氯喹測(cè)定板對(duì)照井中發(fā)育至裂殖體的平均數(shù)分別為118、104及108個(gè)。
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表1.惡性瘧原蟲在各藥井中發(fā)育到裂殖體的例數(shù)
Table 1.Number of cases with falciparum schizont formation in each well 藥物
Drug
各井發(fā)育至裂殖體例數(shù)
No.case with schizont in different well
1
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, 百拇醫(yī)藥
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蒿甲醚
Artemether
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咯萘啶
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氯 喹
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*:1號(hào)為對(duì)照井,2號(hào)井中蒿甲醚、咯萘啶、氯喹含量分別為1.25、0.25和1 pmol,3-9號(hào)井依次倍增。
Well No.1 was control.Well No.2 contained artemether,pyronaridine and chloroquine concentration of 1.25,0.25 and 1 pmol,respectively.The concentration in well No.3-9 was doubled in order.
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表2.云南南部惡性瘧原蟲對(duì)蒿甲醚、咯萘啶、氯喹體外測(cè)定結(jié)果
Table 2.In vitro sensitivity of P.falciparum from south Yunnan to artemether,pyronaridine and chloroquine. 藥物
Drug
例數(shù)
No.
case
惡性瘧原蟲在各藥井的抑制率(%)
Inhibition rate in different well
ID50
, 百拇醫(yī)藥
(nmol/L)
ID95
(nmol/L)
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蒿甲醚
Artemether
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32
11.5
18.4
30.8
51.7
71.7
80.1
91.9
98.9
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咯萘啶
Pyronaridine
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氯 喹
Chloroquine
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3 討論 為了解惡性瘧原蟲對(duì)抗瘧藥的敏感性,指導(dǎo)合理使用抗瘧藥,楊恒林等[5,6]曾在云南邊境地區(qū)測(cè)定了惡性瘧原蟲對(duì)氯喹、阿莫地喹、甲氟喹、奎寧、磺胺多辛/乙胺嘧啶、青蒿琥酯、還原青蒿素、蒿乙醚、咯萘啶等藥的敏感性,而對(duì)蒿甲醚由于制板困難,僅做過一些有限的試驗(yàn)性測(cè)定。為摸索制板方法,進(jìn)行了反復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究。曾用苯乙醇作溶劑制作的測(cè)定板測(cè)得的CIMC、ID50、ID95明顯低于同類藥中的蒿乙醚[6],估計(jì)與藥物溶解不充分有關(guān)。用氯仿溶藥制作的測(cè)定板測(cè)得的結(jié)果與蒿乙醚相似,在4℃恒溫中保存有效期達(dá)8個(gè)月以上。本研究現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定成功率與氯喹、咯萘啶相同,瘧原蟲抑制率亦同氯喹板一樣隨藥物濃度的增加而依次上升,而裂殖體形成數(shù)則依次減少,提示本方法制作的測(cè)定板藥性穩(wěn)定,測(cè)定成功率高,結(jié)果可靠,簡(jiǎn)便易行,可推廣應(yīng)用。
, 百拇醫(yī)藥
蒿甲醚測(cè)定板對(duì)照井平均裂殖體數(shù)與其他兩種測(cè)定板相同,測(cè)定成功率亦然,提示本文所采用的氯仿乙醇溶劑對(duì)瘧原蟲生長(zhǎng)無影響。惡性瘧原蟲在最低蒿甲醚井中的抑制率為11.5%,最高藥物濃度井為98.9%,提示本文設(shè)置的劑量組是恰當(dāng)?shù)摹盒辕懺x氯喹敏感性體內(nèi)觀察法與體外微量測(cè)定法對(duì)比研究結(jié)果[8]顯示在抗性程度較高地區(qū)兩種方法測(cè)定結(jié)果相一致,而抗性較低地區(qū)則體外法較體內(nèi)法靈敏,更能反映敏感性的客觀情況,且較簡(jiǎn)便易行,省時(shí)省力。本文提供的制板方法及數(shù)據(jù)為該藥的敏感性縱向監(jiān)測(cè)奠定了基礎(chǔ)。
咯萘啶在云南僅做過一些藥物臨床研究和敏感性體外測(cè)定[6,7],本文所測(cè)結(jié)果與1988年[2]及1995[6]年相比,ID50、ID95依次上升,比1988年分別上升4.5倍(72/13)和7.6倍(416/48),比1995年上升1.3倍(72/32)和2.9倍(416/108)。本研究29例中有10例原蟲顯示抗性,其5例在最高藥物濃度井中仍能形成裂殖體,提示當(dāng)?shù)貝盒辕懺x對(duì)該藥敏感性繼續(xù)下降,該藥目前似不宜單獨(dú)用于治療當(dāng)?shù)貝盒辕憽?br/>, http://www.www.srpcoatings.com
基金項(xiàng)目:聯(lián)合國(guó)計(jì)劃開發(fā)署/世界銀行/世界衛(wèi)生組織熱帶病研究培訓(xùn)特別規(guī)劃處資助項(xiàng)目(900098).
The project received the financial support from UNDP/World Bank/WHO/TDR(900098).
4 參考文獻(xiàn)
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3 劉德全,等.一種便于現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定惡性瘧原蟲抗藥性的培養(yǎng)基.中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志 1989;7∶112.
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