白細胞介素8對尋常型銀屑病病理形成的動態(tài)研究
作者：商剛 陳艷 張巖
單位：商剛(主治醫(yī)師 醫(yī)學碩士 哈爾濱242醫(yī)院皮膚科 150066)；陳艷(哈爾濱242醫(yī)院)；張巖(哈爾濱醫(yī)科大學附屬皮膚科 教授 主治醫(yī)師)
關鍵詞：銀屑��；IL-8；免疫組化
航空航天醫(yī)藥990301 摘要 目的：為研究白細胞介素8(IL-8)，在尋常型銀屑病病理形成的持續(xù)性作用；方法：我們采取按時間順序連續(xù)性取材，對其用抗IL-8抗體進行免疫組化測定；結果：早期病理變化輕微的皮損已經有了IL-8的表達，隨著病理變化的日益典型化，IL-8的沉積部位下移，由表皮下層至真皮層；結論：IL-8是貫穿于尋常型銀屑病病理的發(fā)生、發(fā)展的重要啟動因素之一。
Study on continous effect taken by IL-8 to
, http://www.www.srpcoatings.com
formation of dermat pathology of psoriasis
Shang Gang,Chen Yan,Zhang Yan
Harbin 242 hospital(150066)
Abstract OBJECTIVE：In order to know how IL-8 take continous effect to formation of dermal pathology of psoriasis; METHODS：We took fresh biopsy speimens of acute eruptive guttate psoriasis,according to duration of its appearance and made them stained with IL-8,RESULTS:IL-8 can be marked in the reratincytes in early stage of psoriasis,and moves downward to the deepth of epidermal and dermal as the dermal patho logy is gradually formed.CONLUSION:IL-8 is one of important facts which set up the mechanism of psoriasis.
, 百拇醫(yī)藥
Key words Psoriasis IL-8 immunohistochemical method
近幾年，國內外對尋常型銀屑病的研究，雖然都集中在免疫異常上，尤其是細胞因子是研究的熱點，但對某一因子在整個病理過程中的作用，尚未有人報道；我們按發(fā)疹時間順序及形態(tài)學變化順序從尋常型銀屑病病人中取材，應用免疫組化的方法，進行IL-8測定，得到了陽性結果，并闡述其結果的理論意義。
1 資料與方法
1.1 取材 臨床已確診為尋常型銀屑病12例，正常人3例，診前1個月未經任何內用及外用治療。患者自愿的情況下，以2%利多卡因局麻，用6mm鉆刀，鉆取皮損2塊，放入3%多聚甲醛，5%戊二醛溶液中固定。取材標準：發(fā)疹1～2天，外觀為1個針鼻大小，幾乎沒有鱗屑的丘疹；5～6天，外觀為2個針鼻大小，有微薄的鱗屑的淡紅色丘疹；7～14天，火柴頭大小，有明顯鱗屑的紅色丘疹，基底有輕度浸潤；30天，肉眼可看到較厚的鱗屑，基底浸潤明顯的暗紅色丘疹或斑塊。
, http://www.www.srpcoatings.com
1.2 IL-8測定方法：①石蠟切片常規(guī)脫蠟、水洗。②0.3%H2O2甲醇溶液阻斷內源性過氧化酶30分鐘。③0.01PH7.3的磷酸緩沖液(以下稱PBS)沖洗3次，每次5分鐘。④滴加第1抗體(兔抗IL-8單克隆抗體×200倍，西安第四軍醫(yī)大學提供)，濕合內室溫反應1小時。⑤PBS沖洗后，滴加第2抗體(生物素化羊抗鼠IgG酶標抗體×50倍，DAX0公司提供)濕合室溫反應30分鐘。⑥PBS沖洗后滴加混合物(生物素與辣根過氧化物酶結合再與卵白素按比例混合×200倍)濕合內室溫反應30分鐘。⑦經PBS沖洗后，DAB顯色液顯色5分鐘～10分鐘，0.05Mtris緩沖液PH7.6100ml，加29mgDAB加5mlH2O2。⑧流水沖洗5分鐘后蘇木素或甲基綠染核。⑨常規(guī)染色、固封、上鏡。
2 結果
見附表。正常皮膚未發(fā)現(xiàn)陽性結果。
, 百拇醫(yī)藥
尋常型銀屑病連續(xù)性皮損的抗IL-8抗體免疫組化結果
表皮免疫病理形態(tài)
真皮免疫病理形態(tài)
發(fā)疹
1～2天
角質層完整，真皮表皮間界線和緩，高倍鏡下基底細胞排列整齊，細胞質及細胞介橋被染成棕黃色，位于角質層下的角細胞較密集，靠近真皮處染色較疏。
真皮深層中，炎細胞聚集，細胞未有被染為棕黃色的細胞。
發(fā)疹
4～5天
表皮增厚，表皮與真皮交界線不規(guī)則，高倍鏡下細胞排列不整齊，角化不全，細胞質及細胞間橋被染為棕黃色，靠近真皮處染色不密集。
, 百拇醫(yī)藥
真皮炎細胞浸潤密集高倍鏡真皮毛細血管周圍的炎細胞呈袖口狀外觀，細胞為單個核細胞。
發(fā)疹
7～14天
30天
表皮過度增生，表皮突深入真皮，角化不全；30天皮損有munro微膿瘍，表皮突被染成棕黃色，細胞質及細胞間皆為棕黃色。
真皮炎細胞聚集，高倍鏡下，有中粒粒細胞侵入表皮，形成帶狀，聚集的炎細胞核周圍被染成棕黃色。
3 討論
本實驗通過對不同發(fā)疹時間的皮損進行IL-8的免疫測定，結果顯示角細胞內及細胞間橋有大量棕黃色物質存在，由于第1抗體是抗IL-8抗體，并被稀釋200倍，在發(fā)疹1～2天及4～5天表皮病理變化不明顯及極輕微時，角細胞內及細胞間便有了IL-8的存在。這時真皮炎細胞的聚集在真皮的深處，而IL-8沉積主要在靠近角質層的上部角朊細胞居多，而正常皮膚與未累及皮膚未發(fā)現(xiàn)，提示角細胞內IL-8可能是尋常型銀屑病早期病理變化的重要免疫學指標。Sticherling等用天然IL-8單克隆抗體(52E8)研究IL-8的組織分布，發(fā)現(xiàn)正常皮膚和銀屑病皮膚的基底層上部的角朊細胞都可見細胞內陽性染色，但銀屑病染色較強〔1〕。我們的實驗結果與其在部位上相似，但本實驗正常人未見。發(fā)疹7～14天及30天的皮損，IL-8主要存在于表皮突接近真皮處，這與“Nickoloff等用免疫組化技術結果相似，Nickoloff等發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損內IL-8存在于基底細胞〔2〕。我們所做，除了基底朊細細胞，角細胞也有明顯表達。這時光鏡下，真皮的炎細胞離表皮很近，我們知道：IL-8是中性粒細胞及T淋巴細胞的趨化劑〔3〕，表明表皮突表達IL-8與中性粒細胞進入表皮形成murre微膿瘍及表皮炎細胞浸潤，從而誘發(fā)過度增生有關。因此，IL-8是引發(fā)表皮炎性增生的重要啟動因。這時，真皮內，炎細胞聚集處，炎細胞核外被染為棕黃色。表明真皮內亦有IL-8的存在。這個結果在銀屑病的研究中，國內外文獻未見報道。人IL-8是一種多源性細胞因子，可來自單核細胞〔4〕、巨噬細胞〔5〕、2倍體皮膚纖維細胞及血管內皮細胞等〔6〕。schroder等發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損表皮內有大量的IL-8存在，認為表皮細胞亦是IL-8的來源之一〔7〕。有人用體外培養(yǎng)人類真皮，并使用IL-1及TNF刺激真皮內的纖維細胞，位于炎細胞聚集處，為單個細胞，有可能是淋巴細胞。有待于進一步證實。IL-8對T淋巴細胞都有較強趨化作用，在后期出現(xiàn)IL-8則肯定與真皮炎癥反應擴大有關。這樣，表皮與真皮都表現(xiàn)IL-8的存在，表明IL-8在銀屑病中，對其病理形成，貫穿于整個過程，它是表皮炎癥增生及真皮炎癥增生的重要中介，它可以引發(fā)炎癥的聚集及擴展，因此它是重要的啟動因。 參考文獻
, http://www.www.srpcoatings.com
1 Stecherling M et al.J-snvest-Dermatol,1991 Jut;97(1):73-9
2 Nickoloff BJ et al.Am-J-Pathol.1991;Jani 138(1);129-40
3 Barkar;J-NWN-Lancet,1991;388(8761);227-30
4 Arch-Dermatol Res 1985;278(2):92-6
5 Wolpe SD et al.J Exp Med;1988;Febl;167(2)570-81
6 Larsen CG et al.Science;1989 Mar 7;243(4897):1464-6
7 Schroder-JM et al.J-Invest-Dermatol;1992 Feb;98(2):241-7
1999年6月6日收稿, http://www.www.srpcoatings.com
單位：商剛(主治醫(yī)師 醫(yī)學碩士 哈爾濱242醫(yī)院皮膚科 150066)；陳艷(哈爾濱242醫(yī)院)；張巖(哈爾濱醫(yī)科大學附屬皮膚科 教授 主治醫(yī)師)
關鍵詞：銀屑��；IL-8；免疫組化
航空航天醫(yī)藥990301 摘要 目的：為研究白細胞介素8(IL-8)，在尋常型銀屑病病理形成的持續(xù)性作用；方法：我們采取按時間順序連續(xù)性取材，對其用抗IL-8抗體進行免疫組化測定；結果：早期病理變化輕微的皮損已經有了IL-8的表達，隨著病理變化的日益典型化，IL-8的沉積部位下移，由表皮下層至真皮層；結論：IL-8是貫穿于尋常型銀屑病病理的發(fā)生、發(fā)展的重要啟動因素之一。
Study on continous effect taken by IL-8 to
, http://www.www.srpcoatings.com
formation of dermat pathology of psoriasis
Shang Gang,Chen Yan,Zhang Yan
Harbin 242 hospital(150066)
Abstract OBJECTIVE：In order to know how IL-8 take continous effect to formation of dermal pathology of psoriasis; METHODS：We took fresh biopsy speimens of acute eruptive guttate psoriasis,according to duration of its appearance and made them stained with IL-8,RESULTS:IL-8 can be marked in the reratincytes in early stage of psoriasis,and moves downward to the deepth of epidermal and dermal as the dermal patho logy is gradually formed.CONLUSION:IL-8 is one of important facts which set up the mechanism of psoriasis.
, 百拇醫(yī)藥
Key words Psoriasis IL-8 immunohistochemical method
近幾年，國內外對尋常型銀屑病的研究，雖然都集中在免疫異常上，尤其是細胞因子是研究的熱點，但對某一因子在整個病理過程中的作用，尚未有人報道；我們按發(fā)疹時間順序及形態(tài)學變化順序從尋常型銀屑病病人中取材，應用免疫組化的方法，進行IL-8測定，得到了陽性結果，并闡述其結果的理論意義。
1 資料與方法
1.1 取材 臨床已確診為尋常型銀屑病12例，正常人3例，診前1個月未經任何內用及外用治療。患者自愿的情況下，以2%利多卡因局麻，用6mm鉆刀，鉆取皮損2塊，放入3%多聚甲醛，5%戊二醛溶液中固定。取材標準：發(fā)疹1～2天，外觀為1個針鼻大小，幾乎沒有鱗屑的丘疹；5～6天，外觀為2個針鼻大小，有微薄的鱗屑的淡紅色丘疹；7～14天，火柴頭大小，有明顯鱗屑的紅色丘疹，基底有輕度浸潤；30天，肉眼可看到較厚的鱗屑，基底浸潤明顯的暗紅色丘疹或斑塊。
, http://www.www.srpcoatings.com
1.2 IL-8測定方法：①石蠟切片常規(guī)脫蠟、水洗。②0.3%H2O2甲醇溶液阻斷內源性過氧化酶30分鐘。③0.01PH7.3的磷酸緩沖液(以下稱PBS)沖洗3次，每次5分鐘。④滴加第1抗體(兔抗IL-8單克隆抗體×200倍，西安第四軍醫(yī)大學提供)，濕合內室溫反應1小時。⑤PBS沖洗后，滴加第2抗體(生物素化羊抗鼠IgG酶標抗體×50倍，DAX0公司提供)濕合室溫反應30分鐘。⑥PBS沖洗后滴加混合物(生物素與辣根過氧化物酶結合再與卵白素按比例混合×200倍)濕合內室溫反應30分鐘。⑦經PBS沖洗后，DAB顯色液顯色5分鐘～10分鐘，0.05Mtris緩沖液PH7.6100ml，加29mgDAB加5mlH2O2。⑧流水沖洗5分鐘后蘇木素或甲基綠染核。⑨常規(guī)染色、固封、上鏡。
2 結果
見附表。正常皮膚未發(fā)現(xiàn)陽性結果。
, 百拇醫(yī)藥
尋常型銀屑病連續(xù)性皮損的抗IL-8抗體免疫組化結果
表皮免疫病理形態(tài)
真皮免疫病理形態(tài)
發(fā)疹
1～2天
角質層完整，真皮表皮間界線和緩，高倍鏡下基底細胞排列整齊，細胞質及細胞介橋被染成棕黃色，位于角質層下的角細胞較密集，靠近真皮處染色較疏。
真皮深層中，炎細胞聚集，細胞未有被染為棕黃色的細胞。
發(fā)疹
4～5天
表皮增厚，表皮與真皮交界線不規(guī)則，高倍鏡下細胞排列不整齊，角化不全，細胞質及細胞間橋被染為棕黃色，靠近真皮處染色不密集。
, 百拇醫(yī)藥
真皮炎細胞浸潤密集高倍鏡真皮毛細血管周圍的炎細胞呈袖口狀外觀，細胞為單個核細胞。
發(fā)疹
7～14天
30天
表皮過度增生，表皮突深入真皮，角化不全；30天皮損有munro微膿瘍，表皮突被染成棕黃色，細胞質及細胞間皆為棕黃色。
真皮炎細胞聚集，高倍鏡下，有中粒粒細胞侵入表皮，形成帶狀，聚集的炎細胞核周圍被染成棕黃色。
3 討論
本實驗通過對不同發(fā)疹時間的皮損進行IL-8的免疫測定，結果顯示角細胞內及細胞間橋有大量棕黃色物質存在，由于第1抗體是抗IL-8抗體，并被稀釋200倍，在發(fā)疹1～2天及4～5天表皮病理變化不明顯及極輕微時，角細胞內及細胞間便有了IL-8的存在。這時真皮炎細胞的聚集在真皮的深處，而IL-8沉積主要在靠近角質層的上部角朊細胞居多，而正常皮膚與未累及皮膚未發(fā)現(xiàn)，提示角細胞內IL-8可能是尋常型銀屑病早期病理變化的重要免疫學指標。Sticherling等用天然IL-8單克隆抗體(52E8)研究IL-8的組織分布，發(fā)現(xiàn)正常皮膚和銀屑病皮膚的基底層上部的角朊細胞都可見細胞內陽性染色，但銀屑病染色較強〔1〕。我們的實驗結果與其在部位上相似，但本實驗正常人未見。發(fā)疹7～14天及30天的皮損，IL-8主要存在于表皮突接近真皮處，這與“Nickoloff等用免疫組化技術結果相似，Nickoloff等發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損內IL-8存在于基底細胞〔2〕。我們所做，除了基底朊細細胞，角細胞也有明顯表達。這時光鏡下，真皮的炎細胞離表皮很近，我們知道：IL-8是中性粒細胞及T淋巴細胞的趨化劑〔3〕，表明表皮突表達IL-8與中性粒細胞進入表皮形成murre微膿瘍及表皮炎細胞浸潤，從而誘發(fā)過度增生有關。因此，IL-8是引發(fā)表皮炎性增生的重要啟動因。這時，真皮內，炎細胞聚集處，炎細胞核外被染為棕黃色。表明真皮內亦有IL-8的存在。這個結果在銀屑病的研究中，國內外文獻未見報道。人IL-8是一種多源性細胞因子，可來自單核細胞〔4〕、巨噬細胞〔5〕、2倍體皮膚纖維細胞及血管內皮細胞等〔6〕。schroder等發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損表皮內有大量的IL-8存在，認為表皮細胞亦是IL-8的來源之一〔7〕。有人用體外培養(yǎng)人類真皮，并使用IL-1及TNF刺激真皮內的纖維細胞，位于炎細胞聚集處，為單個細胞，有可能是淋巴細胞。有待于進一步證實。IL-8對T淋巴細胞都有較強趨化作用，在后期出現(xiàn)IL-8則肯定與真皮炎癥反應擴大有關。這樣，表皮與真皮都表現(xiàn)IL-8的存在，表明IL-8在銀屑病中，對其病理形成，貫穿于整個過程，它是表皮炎癥增生及真皮炎癥增生的重要中介，它可以引發(fā)炎癥的聚集及擴展，因此它是重要的啟動因。 參考文獻
, http://www.www.srpcoatings.com
1 Stecherling M et al.J-snvest-Dermatol,1991 Jut;97(1):73-9
2 Nickoloff BJ et al.Am-J-Pathol.1991;Jani 138(1);129-40
3 Barkar;J-NWN-Lancet,1991;388(8761);227-30
4 Arch-Dermatol Res 1985;278(2):92-6
5 Wolpe SD et al.J Exp Med;1988;Febl;167(2)570-81
6 Larsen CG et al.Science;1989 Mar 7;243(4897):1464-6
7 Schroder-JM et al.J-Invest-Dermatol;1992 Feb;98(2):241-7
1999年6月6日收稿, http://www.www.srpcoatings.com