氣相色譜法分離測(cè)定環(huán)孢素A中乙醇及丙二醇的含量
作者：王俊秋 龐青云 余立
單位：王俊秋 龐青云 余立(北京市藥品檢驗(yàn)所 北京 100035)
關(guān)鍵詞：氣相色譜法；乙醇；丙二醇；環(huán)孢素A
藥物分析雜志000207 摘要 目的：建立一個(gè)氣相色譜條件同時(shí)分離測(cè)定環(huán)孢素A中乙醇及丙二醇的含量。方法：以GDX-101為固定相，柱長(zhǎng)為2 m，進(jìn)樣口溫度為210 ℃，檢測(cè)器為280 ℃，柱溫采用程序升溫，氮?dú)鉃檩d氣，以二甲基亞砜為溶劑，以正丙醇為內(nèi)標(biāo)。結(jié)果：乙醇及丙二醇進(jìn)樣量分別在2.0～6.0 μg，1.0～3.0 μg，其峰面積與濃度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，加樣回收率分別為99.9%(RSD<0.8%，n=5)，101.4%(RSD<1.1%，n=5)，精密度良好。結(jié)論：此氣相色譜條件可同時(shí)測(cè)定環(huán)孢素A中乙醇及丙二醇的含量，方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確。
Determination of Ethanol and Propylene Glycol in Cyclosprin A
, 百拇醫(yī)藥
by Gas Chromatography
Wang Junqiu,Pang Qingyun and Yu Li
(Beijing Institute for Drug Control, Beijing 100035)
Abstract, http://www.www.srpcoatings.com
Key words GC, ethanol, propylene glycol, cyclosprin A
山地明(環(huán)孢素A)為諾華制藥有限公司的產(chǎn)品，是一種免疫抑制劑，用于器官移植和骨髓移植中的抑制排斥現(xiàn)象以及自身免疫疾病。廠方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中乙醇及丙二醇的含量采用石英毛細(xì)管柱測(cè)定，此種色譜柱在國(guó)內(nèi)使用不普及，我們經(jīng)多次試驗(yàn)，摸索出一較好的氣相色譜條件，適用于國(guó)內(nèi)檢測(cè)，即以GDX-101為固定相，柱長(zhǎng)為2 m，采用氫離子火焰檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度為210 ℃，檢測(cè)器為280 ℃，柱溫采用程序升溫，氮?dú)鉃檩d氣，以二甲基亞砜為溶劑，以正丙醇為內(nèi)標(biāo)，可同時(shí)分離測(cè)定環(huán)孢素A中乙醇及丙二醇的含量，改進(jìn)后的方法，乙醇與正丙醇的分離度為3.1，丙二醇與正丙醇的分離度為5.0，符合中國(guó)藥典1995年版中乙醇量度檢查的分離度要求[1]，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
1 儀器與試藥
氣相色譜儀：GC-15A，日本島津公司生產(chǎn)。
, http://www.www.srpcoatings.com
氣相色譜柱：玻璃柱，長(zhǎng)2 m，固定相為GDX-101。
乙醇、異丙醇、丙二醇均為氣相色譜純，二甲基亞砜為色譜純。
樣品：環(huán)孢素A膠囊(山地明)，由諾華公司提供，批號(hào)為187MFD0797；241MFD0797；166MFD0797；483MFD0797；477MFD0797。
標(biāo)準(zhǔn)貯備液及內(nèi)標(biāo)貯備液：精密稱(chēng)取氣相級(jí)的乙醇及丙二醇2.50及1.25 g分置50 mL容量瓶中，加二甲基亞砜至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液；精密量取正丙醇5.0 mL置50 mL量瓶中，加二甲基亞砜至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)貯備液。
2 試驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 采用GDX-101為固定相，柱長(zhǎng)為2 m，氮?dú)鉃檩d氣，采用氫離子火焰檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度為210 ℃，檢測(cè)器為280 ℃，柱溫采用程序升溫，即初始為165 ℃，保持12 min，以40 ℃。min-1升至280 ℃，并保持20 min，檢測(cè)器溫度為280 ℃，進(jìn)樣量為2 μL。
, 百拇醫(yī)藥
2.2 分離度試驗(yàn) 稱(chēng)取乙醇、丙二醇及正丙醇各50 mg置同一50 mL量瓶中，加二甲基亞砜至刻度，搖勻，進(jìn)樣2 μL，按上述色譜條件試驗(yàn)，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1-A，乙醇、丙二醇及正丙醇的保留時(shí)間分別為1.15，2.22，7.54 min，計(jì)算乙醇與正丙醇及丙二醇與正丙醇的分離度，其分離度分別為3.1和5.0。
圖1 分離度色譜(A)及樣品測(cè)定(B)色譜圖
1.乙醇 2.正丙醇 3.丙二醇 4.二甲基亞砜
2.3 線(xiàn)性范圍及標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 分別精密量取乙醇和丙二醇標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分別置50 mL量瓶中，并分別加入內(nèi)標(biāo)貯備液1.0 mL，使乙醇終濃度為1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mg.mL-1，丙二醇的終濃度為0.5，0.75，1.0，1.25，1.5 mg.mL-1，分別進(jìn)樣2 μL，以乙醇及丙二醇的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以它們的峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比為縱坐標(biāo)，分別進(jìn)行線(xiàn)性回歸，結(jié)果線(xiàn)性關(guān)系良好，乙醇、丙二醇回歸方程分別為：
, http://www.www.srpcoatings.com
A=8.935×103C+7.858×102 r=0.998 8
A=8.086×103C-1.649×102 r=0.999 9
2.4 精密度試驗(yàn) 用乙醇與丙二醇濃度分別2.0及1.0 mg.mL-1的溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果乙醇與丙二醇的RSD分別為0.7%和1.0%，精密度良好。
2.5 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取已知乙醇與丙二醇含量的樣品2粒，用二甲基亞砜溶解，置50 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)貯備液1.0 mL，并加二甲基亞砜至刻度，搖勻，精密量取此溶液4.0，4.5，5.0，5.5，6.0 mL，分別加入乙醇與丙二醇的濃度分別為2.0 mg.mL-1及1.0 mg.mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液6.0，5.5，5.0，4.5，4.0 mL，混勻，量取混勻后的溶液2 μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定這5份溶液的乙醇和丙二醇含量，計(jì)算回收率，乙醇的平均回收率為99.9%(RSD<0.8%，n=5)，丙二醇的平均回收率為101.4%(RSD<1.1%，n=5)。
, 百拇醫(yī)藥
2.6 樣品的測(cè)定 取乙醇和丙二醇標(biāo)準(zhǔn)貯備液2.0 mL，內(nèi)標(biāo)貯備液1.0 mL，并加二甲基亞砜至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；取環(huán)孢素A膠囊2粒，置50 mL量瓶中，用二甲基亞砜溶解，精密加入內(nèi)標(biāo)貯備液1.0 mL，并加二甲基亞砜至刻度，搖勻，作為樣品溶液；分別量取對(duì)照品溶液和樣品溶液各2 μL，注入氣相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，以?xún)?nèi)標(biāo)法計(jì)算含量，即得；見(jiàn)圖1-B。
2.7 對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果 取環(huán)孢素A樣品5批，用改進(jìn)后的方法測(cè)定樣品中乙醇和丙二醇的含量，與廠方測(cè)定數(shù)據(jù)相比，結(jié)果基本吻合，見(jiàn)表1。
表1 乙醇和丙二醇對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果(%) 批號(hào)
本法結(jié)果
廠方測(cè)定數(shù)據(jù)
乙醇
丙二醇
, 百拇醫(yī)藥
乙醇
丙二醇
187MFD0797
101.0
106.3
100.5
105.0
241MFD0797
99.2
99.2
100.6
100.6
166MFD0797
, http://www.www.srpcoatings.com
101.7
102.7
101.3
103.0
483MFD0797
98.8
96.8
99.3
97.2
477MFD0797
99.1
98.1
98.9
, http://www.www.srpcoatings.com
97.7
3 討論
3.1 本法與原廠方方法相比，方法更為簡(jiǎn)便，條件普及，有利于對(duì)樣品質(zhì)量的控制。
3.2 原廠方標(biāo)準(zhǔn)在測(cè)定乙醇含量時(shí)，以正丁醇為溶劑，由于正丁醇的保留時(shí)間與丙二醇過(guò)于接近，分離度達(dá)不到要求，本法采用二甲基亞砜為溶劑，不影響樣品的溶解，同時(shí)使丙二醇與二甲基亞砜的分離度符合定量分析的要求。
3.3 曾用固定相為GDX-401的氣相柱進(jìn)行檢測(cè)，乙醇與正丙醇得到完全分離，但丙二醇與溶劑峰重疊，分離度達(dá)不到要求。
3.4 采用程序升溫，可使溶劑出峰時(shí)間加快，縮短分析時(shí)間。
參考文獻(xiàn)
1，中國(guó)藥典.1995.二部：附錄44
(本文于1998年12月16日收到), 百拇醫(yī)藥
單位：王俊秋 龐青云 余立(北京市藥品檢驗(yàn)所 北京 100035)
關(guān)鍵詞：氣相色譜法；乙醇；丙二醇；環(huán)孢素A
藥物分析雜志000207 摘要 目的：建立一個(gè)氣相色譜條件同時(shí)分離測(cè)定環(huán)孢素A中乙醇及丙二醇的含量。方法：以GDX-101為固定相，柱長(zhǎng)為2 m，進(jìn)樣口溫度為210 ℃，檢測(cè)器為280 ℃，柱溫采用程序升溫，氮?dú)鉃檩d氣，以二甲基亞砜為溶劑，以正丙醇為內(nèi)標(biāo)。結(jié)果：乙醇及丙二醇進(jìn)樣量分別在2.0～6.0 μg，1.0～3.0 μg，其峰面積與濃度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，加樣回收率分別為99.9%(RSD<0.8%，n=5)，101.4%(RSD<1.1%，n=5)，精密度良好。結(jié)論：此氣相色譜條件可同時(shí)測(cè)定環(huán)孢素A中乙醇及丙二醇的含量，方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確。
Determination of Ethanol and Propylene Glycol in Cyclosprin A
, 百拇醫(yī)藥
by Gas Chromatography
Wang Junqiu,Pang Qingyun and Yu Li
(Beijing Institute for Drug Control, Beijing 100035)
Abstract, http://www.www.srpcoatings.com
Key words GC, ethanol, propylene glycol, cyclosprin A
山地明(環(huán)孢素A)為諾華制藥有限公司的產(chǎn)品，是一種免疫抑制劑，用于器官移植和骨髓移植中的抑制排斥現(xiàn)象以及自身免疫疾病。廠方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中乙醇及丙二醇的含量采用石英毛細(xì)管柱測(cè)定，此種色譜柱在國(guó)內(nèi)使用不普及，我們經(jīng)多次試驗(yàn)，摸索出一較好的氣相色譜條件，適用于國(guó)內(nèi)檢測(cè)，即以GDX-101為固定相，柱長(zhǎng)為2 m，采用氫離子火焰檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度為210 ℃，檢測(cè)器為280 ℃，柱溫采用程序升溫，氮?dú)鉃檩d氣，以二甲基亞砜為溶劑，以正丙醇為內(nèi)標(biāo)，可同時(shí)分離測(cè)定環(huán)孢素A中乙醇及丙二醇的含量，改進(jìn)后的方法，乙醇與正丙醇的分離度為3.1，丙二醇與正丙醇的分離度為5.0，符合中國(guó)藥典1995年版中乙醇量度檢查的分離度要求[1]，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
1 儀器與試藥
氣相色譜儀：GC-15A，日本島津公司生產(chǎn)。
, http://www.www.srpcoatings.com
氣相色譜柱：玻璃柱，長(zhǎng)2 m，固定相為GDX-101。
乙醇、異丙醇、丙二醇均為氣相色譜純，二甲基亞砜為色譜純。
樣品：環(huán)孢素A膠囊(山地明)，由諾華公司提供，批號(hào)為187MFD0797；241MFD0797；166MFD0797；483MFD0797；477MFD0797。
標(biāo)準(zhǔn)貯備液及內(nèi)標(biāo)貯備液：精密稱(chēng)取氣相級(jí)的乙醇及丙二醇2.50及1.25 g分置50 mL容量瓶中，加二甲基亞砜至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液；精密量取正丙醇5.0 mL置50 mL量瓶中，加二甲基亞砜至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)貯備液。
2 試驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 采用GDX-101為固定相，柱長(zhǎng)為2 m，氮?dú)鉃檩d氣，采用氫離子火焰檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度為210 ℃，檢測(cè)器為280 ℃，柱溫采用程序升溫，即初始為165 ℃，保持12 min，以40 ℃。min-1升至280 ℃，并保持20 min，檢測(cè)器溫度為280 ℃，進(jìn)樣量為2 μL。
, 百拇醫(yī)藥
2.2 分離度試驗(yàn) 稱(chēng)取乙醇、丙二醇及正丙醇各50 mg置同一50 mL量瓶中，加二甲基亞砜至刻度，搖勻，進(jìn)樣2 μL，按上述色譜條件試驗(yàn)，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1-A，乙醇、丙二醇及正丙醇的保留時(shí)間分別為1.15，2.22，7.54 min，計(jì)算乙醇與正丙醇及丙二醇與正丙醇的分離度，其分離度分別為3.1和5.0。
圖1 分離度色譜(A)及樣品測(cè)定(B)色譜圖
1.乙醇 2.正丙醇 3.丙二醇 4.二甲基亞砜
2.3 線(xiàn)性范圍及標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 分別精密量取乙醇和丙二醇標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分別置50 mL量瓶中，并分別加入內(nèi)標(biāo)貯備液1.0 mL，使乙醇終濃度為1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mg.mL-1，丙二醇的終濃度為0.5，0.75，1.0，1.25，1.5 mg.mL-1，分別進(jìn)樣2 μL，以乙醇及丙二醇的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以它們的峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比為縱坐標(biāo)，分別進(jìn)行線(xiàn)性回歸，結(jié)果線(xiàn)性關(guān)系良好，乙醇、丙二醇回歸方程分別為：
, http://www.www.srpcoatings.com
A=8.935×103C+7.858×102 r=0.998 8
A=8.086×103C-1.649×102 r=0.999 9
2.4 精密度試驗(yàn) 用乙醇與丙二醇濃度分別2.0及1.0 mg.mL-1的溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果乙醇與丙二醇的RSD分別為0.7%和1.0%，精密度良好。
2.5 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取已知乙醇與丙二醇含量的樣品2粒，用二甲基亞砜溶解，置50 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)貯備液1.0 mL，并加二甲基亞砜至刻度，搖勻，精密量取此溶液4.0，4.5，5.0，5.5，6.0 mL，分別加入乙醇與丙二醇的濃度分別為2.0 mg.mL-1及1.0 mg.mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液6.0，5.5，5.0，4.5，4.0 mL，混勻，量取混勻后的溶液2 μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定這5份溶液的乙醇和丙二醇含量，計(jì)算回收率，乙醇的平均回收率為99.9%(RSD<0.8%，n=5)，丙二醇的平均回收率為101.4%(RSD<1.1%，n=5)。
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2.6 樣品的測(cè)定 取乙醇和丙二醇標(biāo)準(zhǔn)貯備液2.0 mL，內(nèi)標(biāo)貯備液1.0 mL，并加二甲基亞砜至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；取環(huán)孢素A膠囊2粒，置50 mL量瓶中，用二甲基亞砜溶解，精密加入內(nèi)標(biāo)貯備液1.0 mL，并加二甲基亞砜至刻度，搖勻，作為樣品溶液；分別量取對(duì)照品溶液和樣品溶液各2 μL，注入氣相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，以?xún)?nèi)標(biāo)法計(jì)算含量，即得；見(jiàn)圖1-B。
2.7 對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果 取環(huán)孢素A樣品5批，用改進(jìn)后的方法測(cè)定樣品中乙醇和丙二醇的含量，與廠方測(cè)定數(shù)據(jù)相比，結(jié)果基本吻合，見(jiàn)表1。
表1 乙醇和丙二醇對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果(%) 批號(hào)
本法結(jié)果
廠方測(cè)定數(shù)據(jù)
乙醇
丙二醇
, 百拇醫(yī)藥
乙醇
丙二醇
187MFD0797
101.0
106.3
100.5
105.0
241MFD0797
99.2
99.2
100.6
100.6
166MFD0797
, http://www.www.srpcoatings.com
101.7
102.7
101.3
103.0
483MFD0797
98.8
96.8
99.3
97.2
477MFD0797
99.1
98.1
98.9
, http://www.www.srpcoatings.com
97.7
3 討論
3.1 本法與原廠方方法相比，方法更為簡(jiǎn)便，條件普及，有利于對(duì)樣品質(zhì)量的控制。
3.2 原廠方標(biāo)準(zhǔn)在測(cè)定乙醇含量時(shí)，以正丁醇為溶劑，由于正丁醇的保留時(shí)間與丙二醇過(guò)于接近，分離度達(dá)不到要求，本法采用二甲基亞砜為溶劑，不影響樣品的溶解，同時(shí)使丙二醇與二甲基亞砜的分離度符合定量分析的要求。
3.3 曾用固定相為GDX-401的氣相柱進(jìn)行檢測(cè)，乙醇與正丙醇得到完全分離，但丙二醇與溶劑峰重疊，分離度達(dá)不到要求。
3.4 采用程序升溫，可使溶劑出峰時(shí)間加快，縮短分析時(shí)間。
參考文獻(xiàn)
1，中國(guó)藥典.1995.二部：附錄44
(本文于1998年12月16日收到), 百拇醫(yī)藥