樁蛋白基因克隆及其在肝癌細胞Hep G2中的作用(1)
【摘要】 目的 克隆樁蛋白基因(PXN)的蛋白編碼區(qū)并構建PXN基因真核表達載體,建立PXN穩(wěn)轉肝癌細胞株,分析PXN基因對肝癌細胞的作用。方法 Trizol法提取肝癌細胞總RNA并逆轉錄成cDNA,PCR法擴增PXN基因蛋白編碼區(qū)并構建真核表達質粒pEBFP-PXN。脂質體法轉染肝癌細胞Hep G2,G418篩選培養(yǎng)獲得樁蛋白高表達穩(wěn)轉肝癌細胞株。實時無標記細胞分析檢測細胞生長速率,細胞創(chuàng)傷-愈合實驗分析細胞遷移速率。蛋白免疫印跡法檢測細胞內蛋白表達變化。結果 成功克隆PXN基因并構建真核表達載體pEBFP-PXN。獲得樁蛋白高表達單克隆穩(wěn)轉肝癌細胞株,胞內顯示藍色熒光,蛋白免疫印跡法顯示穩(wěn)轉株內表達外源融合蛋白BFP-PXN。樁蛋白表達不影響Hep G2肝癌細胞的生長速率但可以抑制其細胞遷移,穩(wěn)轉細胞上皮標志蛋白E-Cadherin表達升高、間質標志物N-Cadherin和Vimentin表達下降。結論 PXN基因不影響Hep G2肝癌細胞生長增殖速率但可以抑制其細胞遷移,這可能與其可以影響肝癌細胞上皮-間質轉化標志蛋白表達有關 ......
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