天然竹汁中氨基酸含量的測(cè)定
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摘 要 以竹子為原料，提取天然竹汁，并用氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定了竹汁中的氨基酸含量，對(duì)其測(cè)定的重現(xiàn)性和回收率進(jìn)行了試驗(yàn)。結(jié)果表明，天然竹汁中含有16種氨基酸，含量豐富，其中天冬氨基酸、谷氨酸、絲氨酸、甘氨酸、精氨酸、丙氨酸含量較高，有10mg/100nd以上�？蔀槿梭w體內(nèi)合成蛋白質(zhì)提供原料，并參與體內(nèi)的代謝，這些物質(zhì)基礎(chǔ)為其在保健和藥用作用提供物質(zhì)上的保證。另外，重現(xiàn)性和回收率試驗(yàn)結(jié)果表明，所采用的測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠，要對(duì)測(cè)定條件的選擇必須加以注意。
關(guān)鍵詞 天然竹汁 氨基酸 含量測(cè)定
中國(guó)擁有豐富的竹類(lèi)資源，目前竹汁的藥用和食用價(jià)值也為人們所認(rèn)識(shí)。竹汁清澄透明，竹香淡雅，爽口怡人，具有獨(dú)特的天然性、營(yíng)養(yǎng)性。竹汁中含有人體所必需的常量、微量元素、多種維生素、分解葡萄糖及近20種游離氨基酸，尤其含有人體無(wú)法合成的賴(lài)氨酸、組氨酸、冬氨酸、胱氨酸等，能夠活化人體細(xì)胞，具有抗衰老保健作用，可作為抗氧化劑或保健食品開(kāi)發(fā)原料使用。很多實(shí)驗(yàn)證明鮮竹汁具有清熱化痰、鎮(zhèn)驚開(kāi)竅、清熱宣肺、利咽止咳之功效。
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這些作用來(lái)源于竹汁含有多種復(fù)雜成分的混合物，尤其是氨基酸的化學(xué)成分。本文以廣東特有的竹品種——青皮竹作原料，通過(guò)壓榨的方法提取竹汁的化學(xué)成分，并對(duì)其各類(lèi)氨基酸的含量進(jìn)行了測(cè)定，這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果為竹汁的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提取實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1實(shí)驗(yàn)方法
1.1竹汁的提取
(1)選材：選擇經(jīng)過(guò)l～5年生長(zhǎng)的青皮竹作為原料。
(2)竹材處理：將竹材去枝、去葉、水洗、晾干，備用。
(3)壓榨汁：竹材處理后，將備用竹材送入已清潔干凈的壓榨汁機(jī)內(nèi)，壓榨汁得竹汁(竹汁量為竹材的40%～50%)，竹渣作造紙用原料。
(4)分級(jí)過(guò)濾：將壓榨出的竹汁先通過(guò)第一級(jí)的網(wǎng)篩過(guò)濾，除去壓榨汁時(shí)帶來(lái)的竹渣、枝條等粗物；再經(jīng)二級(jí)紗網(wǎng)過(guò)濾，將竹汁內(nèi)的一些大顆粒過(guò)濾除去；最后經(jīng)微孔過(guò)濾，除去小顆粒，得到淡青色的濃竹汁。
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(5)紫外消毒處理：將竹汁放入裝有高強(qiáng)度紫外光的容器中，保持15rain消毒，備用。
1.2儀器
日立835250型氨基酸自動(dòng)分析儀。
1.3供試樣品的制備
精取上述1.1提取的竹汁樣品10.OOml，濃縮至hnl左右。樣品濃縮液中加入3ml-10ml/L鹽酸溶液，再加入lml去離子水，混合均勻后移入10ml的長(zhǎng)頸安瓿瓶中，抽成真空封口，于110℃加熱水解24h。
水解完畢后放冷，啟封安瓿，將水解液移至lOml量瓶中，以高純水定容至刻度。精密吸取2ml，于50℃真空干燥箱中揮干，反復(fù)操作3次后取出，加入lml專(zhuān)用稀釋液溶解均勻，以微孔濾膜濾入2ml潔凈容器中，待測(cè)。
1.4氨基酸測(cè)定
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測(cè)定條件：層析柱216mm×150mm，離子交換樹(shù)脂日立2619型；緩沖液流速0.2ml·min-1，泵壓90～120kg·cm-2，茚三酮流速0.5ml·min-1；泵壓15～35kg·cm-2，柱溫55℃，進(jìn)樣量50ul，標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣量3nmol/50ul，氧氣壓力O.28kg·cm-2。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。
1.5重現(xiàn)性和回收率試驗(yàn)
取制備好的樣品溶液，按照選定的色譜條件，進(jìn)樣50ul，連續(xù)進(jìn)樣4次，根據(jù)測(cè)定的結(jié)果，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)，以4次結(jié)果的平均值作為氨基酸的含量。
在上述的測(cè)定方法中，加入1.00ml氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定各種氨基酸的回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。
2結(jié)果與討論
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天然竹汁中氨基酸的分析結(jié)果表明，所含的氨基酸種類(lèi)較豐富，達(dá)16種之多，其中尤以天冬氨基酸、谷氨酸、絲氨酸、甘氨酸、精氨酸、丙氨酸含量為高，前三種氨基酸達(dá)到28rag/100ml～46mg/100ml，后三種也有10mg/100ml以上，人體必需的氨基酸含量也很高，這是天然竹汁具有藥用和食用價(jià)值的基礎(chǔ)。氨基酸是人體體內(nèi)合成蛋白質(zhì)的主要原料，各種氨基酸必須滿(mǎn)足一定的構(gòu)成比例，缺少任何一種或比例失調(diào)，都會(huì)影響蛋白質(zhì)的合成，使人體免疫力下降。另外某些氨基酸還能夠參與體內(nèi)的代謝，同時(shí)在基因表達(dá)控制方面它和激素一樣起著重要的作用，有關(guān)天然竹汁中氨基酸含量的多少在保健功效及藥用功效上的作用，有待于進(jìn)一步的探討。本文的結(jié)果為其在保健和藥用等方面的應(yīng)用提供了參考依據(jù)。
采用氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定，控制一定的測(cè)定條件，經(jīng)重現(xiàn)性和回收率試驗(yàn)結(jié)果表明，其標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)和回收率都較好(見(jiàn)表1)，所用的測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠，可用于竹汁氨基酸的測(cè)定方法。但要注意層析柱的大小、離子交換樹(shù)脂類(lèi)型、緩沖液流速、泵壓、茚三酮流速、柱溫、進(jìn)樣量、氧氣壓力等測(cè)定條件的選擇。
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(收稿日期：2006年11月18日), 百拇醫(yī)藥(羅一帆)