單克隆抗體用于血吸蟲病診斷研究進展綜述(1)
【中圖分類號】R758.6【文獻標識碼】A【文章編號】1672-3783(2011)06-0025-01
【摘要】本文綜述單克隆抗體用于血吸蟲病診斷的研究進展。
【關鍵詞】血吸蟲��；免疫診斷；研究進展；綜述
檢測血吸蟲病人血清中的循環(huán)抗原(CAg)不僅能反應血吸蟲感染程度而且能及時評價抗血吸蟲藥物療效，成為目前血吸蟲診斷研究的一個熱點。20世紀80年代至今，國內外寄生蟲學者已把單克隆抗體技術引入到血吸蟲病診斷,可以定性或定量檢測宿主血清中的循環(huán)抗原[1]。
嚴自助等[2]研制了抗CCA-McAb-3D8A直接Dot-ELISA試劑盒，診斷急性、慢性及晚期病人陽性率分別為90.6%、83.2%和30.7%，初步試用于現場，效果良好。dot-ELISA檢測CAg，操作簡便，可用目測判斷結果，可望成為基層診斷或進行流行病學調查的新階段。
, 百拇醫(yī)藥
鄭南才等[3]以制備的2E12單抗用Dot-ELISA檢測血吸蟲病人，急性、慢性和晚期病人血清中CAg檢出率分別為93.0%、80.9%和33.3%。晚期病人檢率低可能系蟲體已經死亡所致。動物實驗中，CAg檢出時間早于糞檢蟲卵時間，2只糞檢一直陰性的感染兔血清CAg檢測陽性。說明該單克隆抗體及其所采用檢測方法在臨床和現場查病中將可有較大應用價值，擬于現場作進一步應用。
婁文嫻等[4]將抗血吸蟲CAg不同組分的單抗進行組合，以夾心ELISA用于CAg檢測，其敏感性比一般用單一單抗提高4~8倍。
婁文嫻等[5]將針對日本血吸蟲不同抗原表位的McAb進行組合后檢測相應的循環(huán)抗原，結果提示敏感性比單株McAb可提高4~8倍，針對GAA和SEA的McAb疊加，在低流行區(qū)的慢性病人中CAg的累計檢出率明顯提高。
婁文嫻等[6]應用3株抗SEA-TCA和AWA-TCA單抗進行組合，定量檢測日本血吸蟲病人血清CAg，獲較滿意結果，其中2個單抗A9和H11在免疫電泳中與SEA-TCA均能形成沉淀弧,提示它們?yōu)榭怪貜捅砦坏膯慰�，但其中任何單個單抗作為捕捉抗體和標記抗體，其檢測結果均不及組合單抗效果好。因此應用單抗的合理配伍作為探針，既是必要的也是可行的。
, 百拇醫(yī)藥
血吸蟲的磷酸丙糖異構酶(TPI)存在于蟲體發(fā)育的各個階段，與血吸蟲的糖酵解代謝有關，檢測血吸蟲的該酶抗原可提示是否有感染的存在。朱蔭昌等[7]應用基因工程方法得到純化的重組日本血吸蟲(中國大陸株)TPI表達蛋白(rSjCTPI),并以此免疫小鼠，制備出高效價的抗rSjCTPI單克隆抗體，以酶標的抗rSjCTPI單抗為檢測系統(tǒng)的ELISA法檢測血吸蟲病人血清CAg，顯示有較好的敏感性和特異性，為血吸蟲病診斷提供了又一有效工具。
裘麗妹等[8]用多抗和單抗夾心ELISA檢測日本血吸蟲病患者血清循環(huán)抗原，在受檢的150例血吸蟲病患者中，敏感性平均為84.7%；40例健康人未出現假陽性反應；74例其他寄生蟲感染者中，有2例并殖吸蟲病患者陽性，其余均未出現交叉反應，結果表明該法是一種較為理想的循環(huán)抗原檢測方法。
Chen等[9]用構建噬菌體展示抗體文庫的方法來制備單克隆抗體，以獲得抗血吸蟲的一種單鏈可變片段抗體(Sc一Fv)，所構建的文庫用ELISA以日本血吸蟲成蟲代謝抗原來檢測，結果顯示了Sc一Fv在血吸蟲病的輔助診斷中具有潛在價值，同時也為大批量制備抗日本血吸蟲單克隆抗體提供了一種新的選擇。
, 百拇醫(yī)藥
張恩英等[10]在已建立ELISA的基礎上，應用3個針對日本血吸蟲抗原不同表位的單克隆抗體標記膠體金，建立檢測日本血吸蟲病患者血清中血吸蟲抗原的斑點金免疫滲濾法(dotimmunosoldfiltrationassay，DIGFA)�？乖涂贵w在硝酸纖維素膜上進行反應，數分鐘后即可用肉眼觀察結果，同時以Dot-ELISA和夾心ELISA作對比，檢測69例慢性血吸蟲病患者血清中的循環(huán)抗原，陽性率為60.9%，特異性為95.2%。和ELISA相比，DIGFA除了省去底物反應步驟外，更主要的是便捷迅速，同時可單份檢測個別病例，不需任何專門設備，故工作人員不需經過特殊培訓就能操作，且檢測效果、敏感性及特異性與ELISA相近。
Deelder等用單克隆抗體結合ELISA進行檢測時，循環(huán)陽極抗原(CirculatingAnodicAntigen，CAA)可使靈敏度達到0.8 ng AWA-TCA/mL，對于EPG≥7的曼氏血吸蟲病人的檢出率可達90.9%[11]，而采用時分免疫熒光法其靈敏度可提高10倍以上[12]。
, 百拇醫(yī)藥
De Jonge等用生物素標記單克隆抗體(IgM亞類)的夾心ELISA法檢測，循環(huán)陰極抗原(Circulating Cathodic Antigen，CCA)最低檢出量為1.0 ng AWA-TCA/mL，提高了靈敏度[13]。此法可檢出輕度感染曼氏血吸蟲病患者。
Fu等[14]以抗蟲卵抗原的多克隆抗體為捕捉抗體，以抗蟲卵抗原的單克隆抗體為標記抗體進行夾心ELISA，檢測日本血吸蟲病患者血清中的循環(huán)Sj70抗原，結果95例慢性和12例急性血吸蟲病患者中分別有93例和12例出現陽性反應，35例慢性患者經吡喹酮治療6~12個月后，有33例Sj70抗原轉為陰性，另2例Sj70抗原水平也有明顯下降。
李劍瑛等[15]采用單克隆抗體反向間接紅細胞凝集試驗(McAb-RIHA)檢測正常人血清，假陽性率為2.17%；對急性、慢性及晚期血吸蟲病患者陽性率分別為99.39%、84.00%、28.57%。急性血吸蟲病患者體內循環(huán)抗原含量高于慢性及晚期血吸蟲病患者，反應滴度的幾何均數分別為慢性及晚期血吸蟲病患者的13.3和36.4倍，而不同感染度的慢性血吸蟲病患者體內循環(huán)抗原的滴度與每克糞便蟲卵數無明顯關系。表明McAb-RIHA檢測日本血吸蟲循環(huán)抗原有較好的敏感性和特異性。
, 百拇醫(yī)藥
尹東等[16]將單克隆抗體JPG3，以JPG3 Sandwich-ELISA檢測62例血吸蟲病患者不同年齡組感染者，經吡喹酮化療后不同時期的CAg陰轉率，差異均無統(tǒng)計學意義。表明JPG3單抗Sandwich-ELISA在評估血吸蟲病經吡喹酮化療后的療效考核中有較好的應用價值。
吳玉龍等[17]以純化的雞抗SEA 卵黃抗體為捕捉杭體，以酶標抗SEA單克隆抗體 NP28-5B 進行雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗法(S-ELISA)檢測急慢性血吸蟲病病人和健康人血清，并與常規(guī)檢測杭體的酶聯免疫吸附試驗SEA-ELISA法做比較。S-ELISA法檢測急性血吸蟲病人循環(huán)抗原的陽性率為100%慢性血吸蟲病人循環(huán)抗原的陽性率為84.4%；健康人的特異性為96%。兩種方法對血吸蟲病的檢出率差異無統(tǒng)計學意義。S-ELISA法可用 于血吸蟲病的免疫診斷。
曾小軍等[18]用辣根過氧化物酶標記血吸蟲單克隆抗體，建立夾心酶標法(S-ELISA)，并檢測血吸蟲病人及其它類型人群的血清。結果S-ELISA對急性血吸蟲病人的檢出率為88.64%；慢性血吸蟲患者和正常人的檢出率分別為75.00%和6.00%，與肝吸蟲和乙型肝炎血清的交叉反應為0，肺吸蟲的交叉反應為10.39%。說明本方法操作簡便，有較好的敏感性與特異性，適宜于對血吸蟲病的檢測。
李雍龍等[19]用兔抗純化31/32 kDa的多克隆抗體及抗31/32 kDa單克隆抗體建立的檢測循環(huán)31/32 kDa抗原的雙抗夾心-ELISA法,對日本血吸蟲病、曼氏血吸蟲病、埃及血吸蟲病和間插血吸蟲病的檢出率分別為88% (n=69)、80% (n=56)、100% (n=40)、94% (n=65)，而檢測正常的中國人和非洲人以及患旋毛蟲病、肺吸蟲病、囊尾蚴病的中國人均呈陰性，提示該法有診斷人類所有重要的血吸蟲蟲種感染的價值。, 百拇醫(yī)藥(楊林青)
【摘要】本文綜述單克隆抗體用于血吸蟲病診斷的研究進展。
【關鍵詞】血吸蟲��；免疫診斷；研究進展；綜述
檢測血吸蟲病人血清中的循環(huán)抗原(CAg)不僅能反應血吸蟲感染程度而且能及時評價抗血吸蟲藥物療效，成為目前血吸蟲診斷研究的一個熱點。20世紀80年代至今，國內外寄生蟲學者已把單克隆抗體技術引入到血吸蟲病診斷,可以定性或定量檢測宿主血清中的循環(huán)抗原[1]。
嚴自助等[2]研制了抗CCA-McAb-3D8A直接Dot-ELISA試劑盒，診斷急性、慢性及晚期病人陽性率分別為90.6%、83.2%和30.7%，初步試用于現場，效果良好。dot-ELISA檢測CAg，操作簡便，可用目測判斷結果，可望成為基層診斷或進行流行病學調查的新階段。
, 百拇醫(yī)藥
鄭南才等[3]以制備的2E12單抗用Dot-ELISA檢測血吸蟲病人，急性、慢性和晚期病人血清中CAg檢出率分別為93.0%、80.9%和33.3%。晚期病人檢率低可能系蟲體已經死亡所致。動物實驗中，CAg檢出時間早于糞檢蟲卵時間，2只糞檢一直陰性的感染兔血清CAg檢測陽性。說明該單克隆抗體及其所采用檢測方法在臨床和現場查病中將可有較大應用價值，擬于現場作進一步應用。
婁文嫻等[4]將抗血吸蟲CAg不同組分的單抗進行組合，以夾心ELISA用于CAg檢測，其敏感性比一般用單一單抗提高4~8倍。
婁文嫻等[5]將針對日本血吸蟲不同抗原表位的McAb進行組合后檢測相應的循環(huán)抗原，結果提示敏感性比單株McAb可提高4~8倍，針對GAA和SEA的McAb疊加，在低流行區(qū)的慢性病人中CAg的累計檢出率明顯提高。
婁文嫻等[6]應用3株抗SEA-TCA和AWA-TCA單抗進行組合，定量檢測日本血吸蟲病人血清CAg，獲較滿意結果，其中2個單抗A9和H11在免疫電泳中與SEA-TCA均能形成沉淀弧,提示它們?yōu)榭怪貜捅砦坏膯慰�，但其中任何單個單抗作為捕捉抗體和標記抗體，其檢測結果均不及組合單抗效果好。因此應用單抗的合理配伍作為探針，既是必要的也是可行的。
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血吸蟲的磷酸丙糖異構酶(TPI)存在于蟲體發(fā)育的各個階段，與血吸蟲的糖酵解代謝有關，檢測血吸蟲的該酶抗原可提示是否有感染的存在。朱蔭昌等[7]應用基因工程方法得到純化的重組日本血吸蟲(中國大陸株)TPI表達蛋白(rSjCTPI),并以此免疫小鼠，制備出高效價的抗rSjCTPI單克隆抗體，以酶標的抗rSjCTPI單抗為檢測系統(tǒng)的ELISA法檢測血吸蟲病人血清CAg，顯示有較好的敏感性和特異性，為血吸蟲病診斷提供了又一有效工具。
裘麗妹等[8]用多抗和單抗夾心ELISA檢測日本血吸蟲病患者血清循環(huán)抗原，在受檢的150例血吸蟲病患者中，敏感性平均為84.7%；40例健康人未出現假陽性反應；74例其他寄生蟲感染者中，有2例并殖吸蟲病患者陽性，其余均未出現交叉反應，結果表明該法是一種較為理想的循環(huán)抗原檢測方法。
Chen等[9]用構建噬菌體展示抗體文庫的方法來制備單克隆抗體，以獲得抗血吸蟲的一種單鏈可變片段抗體(Sc一Fv)，所構建的文庫用ELISA以日本血吸蟲成蟲代謝抗原來檢測，結果顯示了Sc一Fv在血吸蟲病的輔助診斷中具有潛在價值，同時也為大批量制備抗日本血吸蟲單克隆抗體提供了一種新的選擇。
, 百拇醫(yī)藥
張恩英等[10]在已建立ELISA的基礎上，應用3個針對日本血吸蟲抗原不同表位的單克隆抗體標記膠體金，建立檢測日本血吸蟲病患者血清中血吸蟲抗原的斑點金免疫滲濾法(dotimmunosoldfiltrationassay，DIGFA)�？乖涂贵w在硝酸纖維素膜上進行反應，數分鐘后即可用肉眼觀察結果，同時以Dot-ELISA和夾心ELISA作對比，檢測69例慢性血吸蟲病患者血清中的循環(huán)抗原，陽性率為60.9%，特異性為95.2%。和ELISA相比，DIGFA除了省去底物反應步驟外，更主要的是便捷迅速，同時可單份檢測個別病例，不需任何專門設備，故工作人員不需經過特殊培訓就能操作，且檢測效果、敏感性及特異性與ELISA相近。
Deelder等用單克隆抗體結合ELISA進行檢測時，循環(huán)陽極抗原(CirculatingAnodicAntigen，CAA)可使靈敏度達到0.8 ng AWA-TCA/mL，對于EPG≥7的曼氏血吸蟲病人的檢出率可達90.9%[11]，而采用時分免疫熒光法其靈敏度可提高10倍以上[12]。
, 百拇醫(yī)藥
De Jonge等用生物素標記單克隆抗體(IgM亞類)的夾心ELISA法檢測，循環(huán)陰極抗原(Circulating Cathodic Antigen，CCA)最低檢出量為1.0 ng AWA-TCA/mL，提高了靈敏度[13]。此法可檢出輕度感染曼氏血吸蟲病患者。
Fu等[14]以抗蟲卵抗原的多克隆抗體為捕捉抗體，以抗蟲卵抗原的單克隆抗體為標記抗體進行夾心ELISA，檢測日本血吸蟲病患者血清中的循環(huán)Sj70抗原，結果95例慢性和12例急性血吸蟲病患者中分別有93例和12例出現陽性反應，35例慢性患者經吡喹酮治療6~12個月后，有33例Sj70抗原轉為陰性，另2例Sj70抗原水平也有明顯下降。
李劍瑛等[15]采用單克隆抗體反向間接紅細胞凝集試驗(McAb-RIHA)檢測正常人血清，假陽性率為2.17%；對急性、慢性及晚期血吸蟲病患者陽性率分別為99.39%、84.00%、28.57%。急性血吸蟲病患者體內循環(huán)抗原含量高于慢性及晚期血吸蟲病患者，反應滴度的幾何均數分別為慢性及晚期血吸蟲病患者的13.3和36.4倍，而不同感染度的慢性血吸蟲病患者體內循環(huán)抗原的滴度與每克糞便蟲卵數無明顯關系。表明McAb-RIHA檢測日本血吸蟲循環(huán)抗原有較好的敏感性和特異性。
, 百拇醫(yī)藥
尹東等[16]將單克隆抗體JPG3，以JPG3 Sandwich-ELISA檢測62例血吸蟲病患者不同年齡組感染者，經吡喹酮化療后不同時期的CAg陰轉率，差異均無統(tǒng)計學意義。表明JPG3單抗Sandwich-ELISA在評估血吸蟲病經吡喹酮化療后的療效考核中有較好的應用價值。
吳玉龍等[17]以純化的雞抗SEA 卵黃抗體為捕捉杭體，以酶標抗SEA單克隆抗體 NP28-5B 進行雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗法(S-ELISA)檢測急慢性血吸蟲病病人和健康人血清，并與常規(guī)檢測杭體的酶聯免疫吸附試驗SEA-ELISA法做比較。S-ELISA法檢測急性血吸蟲病人循環(huán)抗原的陽性率為100%慢性血吸蟲病人循環(huán)抗原的陽性率為84.4%；健康人的特異性為96%。兩種方法對血吸蟲病的檢出率差異無統(tǒng)計學意義。S-ELISA法可用 于血吸蟲病的免疫診斷。
曾小軍等[18]用辣根過氧化物酶標記血吸蟲單克隆抗體，建立夾心酶標法(S-ELISA)，并檢測血吸蟲病人及其它類型人群的血清。結果S-ELISA對急性血吸蟲病人的檢出率為88.64%；慢性血吸蟲患者和正常人的檢出率分別為75.00%和6.00%，與肝吸蟲和乙型肝炎血清的交叉反應為0，肺吸蟲的交叉反應為10.39%。說明本方法操作簡便，有較好的敏感性與特異性，適宜于對血吸蟲病的檢測。
李雍龍等[19]用兔抗純化31/32 kDa的多克隆抗體及抗31/32 kDa單克隆抗體建立的檢測循環(huán)31/32 kDa抗原的雙抗夾心-ELISA法,對日本血吸蟲病、曼氏血吸蟲病、埃及血吸蟲病和間插血吸蟲病的檢出率分別為88% (n=69)、80% (n=56)、100% (n=40)、94% (n=65)，而檢測正常的中國人和非洲人以及患旋毛蟲病、肺吸蟲病、囊尾蚴病的中國人均呈陰性，提示該法有診斷人類所有重要的血吸蟲蟲種感染的價值。, 百拇醫(yī)藥(楊林青)
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