不同引物標(biāo)記物在顯色法芯片檢測(cè)結(jié)核分支桿菌利福平和異煙肼耐藥基因中應(yīng)用比較
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郭乃洲 王萬(wàn)相 嚴(yán)愛華 馬達(dá) 周步全 馬力 景奉香
【摘要】目的比較不同標(biāo)記物在顯色法芯片檢測(cè)結(jié)核分支桿菌利福平和異煙肼耐藥基因中的影響。方法分別采用地高辛、熒光素和生物素標(biāo)記引物,建立地高辛-抗地高辛、熒光素-抗熒光素和生物素-親和素酶呈色法芯片檢測(cè)結(jié)核分支桿菌利福平(RFP)和異煙肼(INH)耐藥基因方法,同時(shí)用3種方法檢測(cè)46株結(jié)核分支桿菌臨床分離株、19種非結(jié)核分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株、9種非分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株和結(jié)核分支桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株,并對(duì)3種方法的敏感性和重復(fù)性進(jìn)行比較。結(jié)果經(jīng)3種方法平行檢測(cè),46例結(jié)核分支桿菌臨床分離株結(jié)果完全一致;19種非結(jié)核分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株、9種非分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株結(jié)果均為陰性,結(jié)核分支桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株結(jié)果均為野生型;地高辛系統(tǒng)和熒光素系統(tǒng)敏感度為2.0×103拷貝/ml,生物素-親和素系統(tǒng)敏感度為2.0×104拷貝/ml;3種方法均有良好的重復(fù)性。結(jié)論3種方法均具有良好的重復(fù)性和特異性,生物素系統(tǒng)敏感度略低于地高辛系統(tǒng)和熒光素系統(tǒng)。
【關(guān)鍵詞】 地高辛 熒光素 生物素 顯色法 芯片 結(jié)核分支桿菌 利福平 異煙肼 耐藥基因
【基金】江蘇省鹽城市科委立項(xiàng)課題(項(xiàng)目批號(hào)YK2005105)
【分類號(hào)】R450
DNA芯片技術(shù)是近幾年來發(fā)展起來的進(jìn)行大規(guī)模遺傳多態(tài)性檢測(cè)的新方法,是物理學(xué)、微電子學(xué)與生命科學(xué)等學(xué)科的交叉結(jié)合,因其靈敏度高、通量大而被廣泛應(yīng)用于各種基因多態(tài)性及點(diǎn)突變的檢測(cè)。我們采用地高辛、熒光素和生物素分別標(biāo)記引物建立地高辛-抗地高辛、熒光素-抗熒光素和
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摘要：目的比較不同標(biāo)記物在顯色法芯片檢測(cè)結(jié)核分支桿菌利福平和異煙肼耐藥基因中的影響。方法分別采用地高辛、熒光素和生物素標(biāo)記引物，建立地高辛一抗地高辛、熒光素一抗熒光素和生物素一親和素酶呈色法芯片檢測(cè)結(jié)核分支桿菌利福乎(RFP)和異煙肼(INH)耐藥基因方法，同時(shí)用3種方法檢測(cè)46株結(jié)核分支桿菌臨床分離株、19種非結(jié)核分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株、9種非分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株和結(jié)核分支桿菌1-137Rv標(biāo)準(zhǔn)株，并對(duì)3種方法的敏感性和重復(fù)性進(jìn)行比較。結(jié)果經(jīng)3種方法平行檢測(cè)，46例結(jié)核分支桿菌臨床分離株結(jié)果完全一致；19種非結(jié)核分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株、9種非分支桿菌標(biāo)準(zhǔn)株結(jié)果均為陰性，結(jié)核分支桿菌H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株結(jié)果均為野生型；地高辛系統(tǒng)和熒光素系統(tǒng)敏感度為2.0×103拷貝/ml，生物素一親和素系統(tǒng)敏感度為2.0×104拷貝/ml；3種方法均有良好的重復(fù)性。結(jié)論3種方法均具有良好的重復(fù)性和特異性，生物素系統(tǒng)敏感度略低于地高辛系統(tǒng)和熒光素系統(tǒng)。
關(guān)鍵詞：地高辛；熒光素；生物素；顯色法；芯片；結(jié)核分支桿菌；利福平；異煙肼；耐藥基因
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