YKL-40與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及預(yù)后分析(2)
1.3 免疫組化染色主要試劑:YKL-40兔抗人多克隆抗體濃縮液(1∶200),購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司;CD68抗體(標(biāo)記TAM):鼠抗人單克隆抗體(工作液,即用型),購(gòu)自福建邁新生物公司,-4℃保存;通用型兩步法試劑盒(SP)購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司;主要儀器為,光學(xué)顯微鏡:Nikon YS100型;切片機(jī):LEICA RM2145型;電熱恒溫水浴槽:11-2R型,上海醫(yī)療器械五廠;免疫組化孵育盒:福州邁新公司;免疫組化抗原修復(fù)盒:福州邁新公司;醫(yī)用微波爐;電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海市醫(yī)療器械一廠)。方法:采用卵白素-生物素-辣根過氧化物酶復(fù)合物(ABC)法[2] 。
1.4 結(jié)果判定
陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn):用試劑公司提供的表達(dá)陽(yáng)性的切片作為陽(yáng)性對(duì)照。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。每張經(jīng)免疫組化染色之后的切片,均在病變區(qū)隨機(jī)選擇高倍視野(×400),每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,至少5個(gè)隨機(jī)視野,取其平均值。按陽(yáng)性細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞的比例分為4個(gè)等級(jí):未見陽(yáng)性細(xì)胞為(-);陽(yáng)性細(xì)胞小于25%為(+);25%~50%為(++);大于50%為(+++)[3]。
1.5 隨訪
術(shù)后隨訪率為94.74%。時(shí)間自從術(shù)后出院之日開始計(jì)算,以月為單位,觀察的終止日期為2008年2月,在觀察期間死于其他疾病或因某不可控因素而失去聯(lián)系者視為“刪失(sensored)數(shù)據(jù)” ......
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