pGL3—EPO—α—MHC啟動子熒光素酶報告基因質(zhì)粒的構(gòu)建及缺氧調(diào)控功能考察(1)
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[摘要] 目的 考察EPO-α-MHC啟動子在缺氧條件下的調(diào)控表達作用。 方法 構(gòu)建pGL3-EPO-α-MHC啟動子編碼熒光素酶報告基因的質(zhì)粒,以含pGL3-EPO-α-MHC和pGL3-CMV啟動子的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染缺氧和常氧的心肌細胞(H9C2),檢測熒光素酶的表達。 結(jié)果 pGL3-CMV啟動子質(zhì)粒在缺氧條件下的報告基因表達與常氧條件相比顯著下降(P < 0.05),而pGL3-EPO-α-MHC啟動子在缺氧條件下能夠顯著上調(diào)報告基因的表達4.3倍(P < 0.01)。 結(jié)論 EPO-α-MHC啟動子具有缺氧調(diào)控功能。
[關(guān)鍵詞] pGL3-EPO-α-MHC啟動子;熒光素酶報告基因;質(zhì)粒構(gòu)建;缺氧調(diào)控
[中圖分類號] R34 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721(2013)06(a)-0008-03
α-MHC promote是研究報道中常用的一種心肌特異性啟動子,用于調(diào)控治療基因在心肌組織的特異性表達[1]。為了增加治療基因在心肌缺血缺氧區(qū)域的表達,本研究選用促紅細胞生成素(erythropoietin,EPO)作為心肌特異性啟動子的缺氧反應(yīng)調(diào)控元件。構(gòu)建pGL3-EPO-α-MHC啟動子編碼熒光素酶報告基因的質(zhì)粒(pGL3-EPO-α-MHC-LUC),考察該質(zhì)粒在缺氧條件下的表達,評價EPO-α-MHC啟動子的缺氧調(diào)控功能。
1 材料與方法
1.1 儀器與試劑
熒光化學(xué)發(fā)光酶標儀(美國Thermo公司); 紫外分光光度計(美國 Thermo公司) ......
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