環(huán)狀定點(diǎn)誘變技術(shù)在載體構(gòu)建中的應(yīng)用(3)
3討論環(huán)狀定點(diǎn)突變技術(shù)多用于單堿基突變,酶切位點(diǎn)修改和片段刪除報(bào)道較少。本研究擴(kuò)展了該技術(shù)在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用范圍:①抗體藥物Fc結(jié)構(gòu)N297A,L235E和 M428L/N434S等突變改善抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)[14];②去除藥物研發(fā)篩選技術(shù)(單B細(xì)胞篩選技術(shù)[15])的冗余酶切位點(diǎn),加快藥物研發(fā)進(jìn)程;③去除藥物開發(fā)早期目標(biāo)蛋白攜帶的His6、HA或GFP等標(biāo)簽[16],促進(jìn)藥物研發(fā)早期活性評價(jià)。本研究環(huán)狀定點(diǎn)誘變技術(shù)刪除的PelB信號肽長度僅為63 bp,理論可以實(shí)現(xiàn)更長片段的刪除(筆者在XTEN融合蛋白技術(shù)研究中成功刪除1728 bp的片段);此外,技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)連續(xù)1~6個(gè)堿基的任意突變,理論可以實(shí)現(xiàn)更長堿基對發(fā)突變(限制因素為引物合成長度),下一步研究擬證明該技術(shù)的最長突變極限。
本研究驗(yàn)證了環(huán)狀定點(diǎn)突變技術(shù)在單堿基突變中應(yīng)用的可行性 ......
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