熊果酸抗肝纖維化作用與Ang Ⅱ/AT1R 信號(hào)通路的相關(guān)性
灌胃,試劑盒,1材料與方法,2方法,3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法,2結(jié)果,1四組大鼠肝臟結(jié)構(gòu)的比較,2四組大鼠肝臟肝纖維化METAVIR評(píng)分的比較,3四組大鼠血清AST,ALT,TBil水平的比較,4四組大鼠肝組織
陳 濤 劉 聰 萬思哲 朱 萱▲1.江西省撫州市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江西撫州 344099；2.南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，江西南昌 330006
肝纖維化是各種病因(如病毒、血吸蟲、酒精、非酒精性脂肪性肝炎、膽汁淤積、自身免疫性肝病等)引起肝損傷后細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)彌漫性過度沉積與瘢痕形成的病理過程，是肝臟對(duì)慢性損傷的病理修復(fù)反應(yīng)[1-2]。肝纖維化的持續(xù)發(fā)展最終可導(dǎo)致肝硬化甚至肝癌，嚴(yán)重危害人類健康[3-4]。Marcellin 等[5-6]研究發(fā)現(xiàn)，早期對(duì)肝纖維化進(jìn)行藥物干預(yù)可逆轉(zhuǎn)肝纖維化，從而降低死亡率。 在肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展過程中，Ang Ⅱ被認(rèn)為是重要的促纖維化因子之一，Sahara 等[7]研究發(fā)現(xiàn)Ang Ⅱ可以通過作用于 AT1R，誘導(dǎo)I 型膠原的合成，從而促進(jìn)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。
中藥單體熊果酸(ursolic acid，UA)是一種五環(huán)三萜羧基酸類化合物，具有保護(hù)肝臟功能、抗菌、抗癌、抗氧化和抗炎等藥理活性[8-11]。 本課題組前期研究成果表明，UA 可能通過抑制NOX4/ROS 和RhoA/ROCK1信號(hào)通路，減少C57BL/6 野生型小鼠的肝臟內(nèi)膠原沉積[12]。因此，本研究將進(jìn)一步探討UA 減少肝臟內(nèi)膠原沉積是否與其抑制肝臟Ang Ⅱ/AT1R 信號(hào)通路有關(guān)，闡明UA 的抗肝纖維化分子機(jī)制，為其應(yīng)用于肝纖維化治療提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 主要試劑 UA(Sigma-Aldrich 公司)；培哚普利(MedChemExpress 公司)；血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、總膽紅素(total bilirubin，TBil)檢測(cè)試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技有限公司)；BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒(碧云天生物科技公司)；天狼星紅染色試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)；4%的多聚甲醛固定液(北京索萊寶科技有限公司)；mRNA 引物(生工生物工程上海股份有限公司)；總RNA 提取試劑盒、cDNA 第一鏈合成試劑盒、熒光定量PCR 試劑盒(北京天根生化科技公司)；兔抗鼠Ang Ⅱ多克隆抗體(英國(guó)Abcam 公司)；兔抗鼠AT1R 多克隆抗體(英國(guó)Abcam 公司)、兔抗鼠Ⅰ型膠原蛋白(Collagen-Ⅰ)多克隆抗體(英國(guó)Abcam 公司)、兔抗鼠α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin ......
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